Medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de glucosa, lactosa, sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico.
Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.
Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol,el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.
Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.
Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol,el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.
Fórmula (en gramos por litro)
| Instrucciones | |
Extracto de carne
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3.0
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Suspender 62,5 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar bien y calentar con agitación frecuente, hervir 1 o 2 minutos hasta disolución total. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo. Esterilizar a 121°C por 15 minutos. Enfriar en pico de flauta profundo.
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Pluripeptona
|
20.0
| |
Cloruro de sodio
|
5.0
| |
Lactosa
|
10.0
| |
Sacarosa
|
10.0
| |
Glucosa
|
1.0
| |
Sulfato de hierro y amonio
|
0.2
| |
Tiosulfato de sodio
|
0.2
| |
Rojo de fenol
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0.025
| |
Agar
|
13.0
| |
pH final: 7.3 ± 0.2
| ||
Siembra
A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio.
Incubación
A 35-37°C durante 24 horas, en aerobiosis.
A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio.
Incubación
A 35-37°C durante 24 horas, en aerobiosis.
Procedimiento
1.- Pesar 6.25 gramos de agar.
2.- Se colocó en el matraz y se le agregó 100ml de agua destilada.
3.- Agitar vigorosamente.
4.- Se coloca en la parrilla hasta dejar hervir.
5.- Una vez que ya hirvió quitar inmediatamente de la parrilla.
6.- Servir en tubo de ensaye pero solo la tercera parte de éste.
Resultados
Resultados
1-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.
2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico.
2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico.
Microorganismo
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Pico/Fondo
|
Producción de gas
|
Producción deácido sulfhídrico
|
E. coli ATCC 25922
|
A/A
|
+
|
-
|
K. pneumoniae ATCC 700603
|
A/A
|
+
|
-
|
P. mirabilis ATCC 43071
|
K/A
|
+
|
+
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S. typhimurium ATCC 14028
|
K/A
|
-
|
+
|
S. enteritidis ATCC 13076
|
K/A
|
+
|
+
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S. flexneri ATCC 12022
|
K/A
|
-
|
-
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P. aeruginosa ATCC 27853
|
K/K
|
-
|
-
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A: ácido
K: alcalino
Características del medio
Medio preparado: rojo
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.
K: alcalino
Características del medio
Medio preparado: rojo
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.
Presentación
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x 100g :Código: B02-134-05
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x 500g :Código: B02-134-06
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