BITÁCORA...: E.M.B.

Este medio (también denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.

Fundamento

Este medio combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por los indicadores eosina y azul de metileno; éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un característico brillo metálico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. Este medio permite el crecimiento de Candida spp. como colonias rosadas y puntiformes; la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. albicans. Enterococcus spp. crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras que Acinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de color azul lavanda; esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporación de azul de metileno a sus membranas. En este medio se obtiene además, un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella.

Fórmula (en gramos por litro)		Instrucciones
Peptona	10.0	Suspender 36 g del polvo en un litro de agua destilada. Reposar 5 minutos; mezclar, calentando a ebullición durante 1 o 2 minutos hasta su disolución. Esterilizar en autoclave a no más de 121°C durante 15 minutos. Enfriar a 45°C y distribuir agitando suavemente.
Lactosa	5.0
Sacarosa	5.0
Fosfato dipotásico	2.0
Agar	13.5
Eosina	0.4
Azul de metileno	0.065
pH final: 7.2 ± 0.2

Siembra

En superficie, por estriado a partir de un inóculo poco denso, para obtener colonias aisladas.

En profundidad, para favorecer el desarrollo de clamidosporas.

Incubación

De 24 a 48 horas a 35-37 °C, en aerobiosis.

Procedimiento

1.- Pesar 3.6 gramos del medio

2.- Se coloca en el matraz y disolver en 100ml de agua destilada, agitar.

3.- Colocar en la parrilla y dejar que hierva

4.- Una vez que hierva quitar inmediatamente de la parrilla.

5.- Posteriormente servir en cajas de petri y esperar a que se solidifique.

Resultados

Microorganismos	Tipo de Colonia
Escherichia coli ATCC 25922	Verdosas con brillo metálico y centro negro azulado
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603	Mucosas, rosa púrpura, confluentes
Proteus mirabilis ATCC 43071	Incoloras
Enterococcus faecalis ATCC 29212	Incoloras, pequeñas, puntiformes
Shigella flexneri ATCC 12022	Incoloras
Salmonella typhimurium ATCC 14028	Incoloras

Características de medio y colonias.	Escherichia coli.	Citrobacter ssp.	C. Albicans Clamidosporas. Salmonella, Shigella	Enterococcus	Acinetobacter
Lactosa.	+	+	-	-
Sacarosa.	+	+	-	-
Glucosa	+			+
Brillo metálico.	+	+	-
Centro grande y obscuro con periferia azulada o rosada.	+	+	-	-	-
Colonias rosadas y puntiformes.	-	-	+	-	.
Colonias puntiformes y transparente.	-	-	-	+	-
Colonias de azul lavanda.	-	-	-	-	+
Siembra en profundidad.			+	+	+
Siembra en superficie.	+	+	-	-	-
Bacterias Gram -

Características del medio:

Placas preparadas: color púrpura.

La esterilización del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja. El color púrpura se restaura por agitación. La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido, ya que es parte esencial del mismo.

Almacenamiento:

Medio deshidratado: a 10-35 ºC.

Medio preparado: a 2-8 ºC.