ESTAFILOCOCO MEDIO 110

Es un medio selectivo para el aislamiento y diferenciación presuntiva de estafilococos, en base a la producción de pigmentos, la fermentación de manitol y la hidrólisis de gelatina, a partir de alimentos y otras muestras. 

Fundamento

Staphylococcus aureus es un microorganismo que puede causar intoxicación alimentaria, y para su aislamiento, pueden usarse distintos medios sólidos selectivos: Baird Parker Medio (B02-141-05/06), Manitol Salado Agar (B02-118-05/06), o Estafilococo Medio 110 (B02-105-05/06).

En el medio de cultivo, el extracto de levadura y la tripteína aportan los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. La gelatina es el sustrato de la enzima gelatinasa. La lactosa y el manitol son los hidratos de carbono fermentables. El cloruro de sodio, se encuentra en alta concentración, para inhibir el desarrollo de la flora acompañante excepto Staphylococcus spp., lográndose así un medio selectivo para el desarrollo de estos microorganismos. 

Las ventajas de este medio por sobre los otros mencionados anteriormente, es que permite, en la misma placa,

obtener pruebas de identificación presuntiva de especie como ser: desarrollo de pigmentos, fermentación de manitol e hidrólisis de la gelatina.

Fórmula (en gramos por litro)		Instrucciones
Extracto de levadura	2.5	Suspender 149 g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar calentando a ebullición durante 1 o 2 minutos. Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 121°C. Verter en placas y mezclar para dispersar el precipitado.
Tripteína	10.0
Gelatina	30.0
Lactosa	2.0
D-Manitol	10.0
Cloruro de sodio	75.0
Fosfato dipotásico	5.0
Agar	15.0
pH final: 7.0 ± 0.2

Siembra

Directa, en superficie, por estriado o por extensión. 

Incubación

Durante 48 horas, a 35-37 °C, en aerobiosis. 

Resultados 

Observar las características de las colonias y realizar las pruebas de identificación de microorganismos.

1-Fermentación de manitol: agregar unas gotas de púrpura de bromocresol a las zonas donde se encuentran las colonias sospechosas y en una zona de la placa donde no hay desarrollo bacteriano. Comparar el color desarrollado entre estas dos zonas. 

Prueba positiva: cambio de color del indicador del medio en la zona de crecimiento bacteriano. El medio sin desarrollo de microorganismos permanece sin cambio.

Prueba negativa: no hay diferencias de color entre las zonas de crecimiento bacteriano y la zona sin inocular.

2-Hidrólisis de la gelatina: cubrir la placa 5 ml de una solución saturada de sulfato de amonio y colocar en estufa, a 35-37 ºC, en aerobiosis durante 10 minutos. 

Positiva: halo transparente alrededor de las colonias.

Negativa: ausencia de halo transparente alrededor de las colonias.

Microorganismo	Pigmento	Fermentación de manitol	Hidrólisis de la gelatina	Prueba de la coagulasa
S. aureus ATCC 25923	+	+	+	+
S. aureus ATCC 6538	+	+	+	+
S. epidermidis ATCC 14990	-	-	+	-

Notas: 

“Realización de la Prueba de la coagulasa”: agregar a 0,5 ml de plasma heparinizado (preferentemente de conejo o humano), igual volumen de un cultivo de 24 horas en Cerebro Corazón Infusión (B02-146-05/06), obtenido a partir de las colonias sospechosas. Incubar a 35-37 °C durante 2 a 3 horas, en aerobiosis. Los estafilococos coagulasa positivos forman un coágulo antes de ese período.

Limitaciones

-Algunas cepas de Enterococcus faecalis, fermentadoras de manitol, pueden desarrollar en este medio.

-Para realizar la prueba de la coagulasa, se aconseja subcultivar las colonias sospechosas en medios sólidos o líquidos no selectivos, por ejemplo: Agar Nutritivo, Infusión Cerebro Corazón, Triptosa Fosfato Caldo, debido a que si se realiza directamente de este medio de cultivo, puede afectarse la detección por el alto contenido de cloruro de sodio.

Características del medio

Medio preparado: ámbar claro, opalescente con precipitado.

Almacenamiento

Medio deshidratado: a 10-35 ºC.

Medio preparado: a 2-8 ºC.

Presentación
x 100g :Código:  B02-105-05	x 500g :Código:  B02-105-06

PRÁTICA DEL ESTAFILOCOCO MEDIO 110

1.- Preparar la muestra a estudiar (cebolla y cilantro de la cafetería).

2.- Triturar la muestra en un mortero, le colocamos agua destilada.

3.- Filtrar con ayuda de una gasa y un embudo y se coloco en un tubo de ensaye.

4.- El medio ya se había preparado, como se había hecho con  los medios anteriormente.

5.- Después se inoculo la muestra en el medio mediante estrías por agotamiento en toda la caja.

Después de haber dejado incubando nuestro material, al observarlo, notamos que habían pequeñas colonias, de color blanco incoloro, que tenían pequeñísimos halos en sus orillas, tenían una elevación convexa, y tenían forma circular. Por lo que podríamos deducir que la muestra fue negativa en la hidrólisis de la gelatina.

También le realizamos la prueba de coagulasa y catalasa.

COAGULASA

1.- Tomamos plasma de sangre que ya había sido centrifugada, y posteriormente inoculamos la bacteria ahí con ayuda del asa, posteriormente se llevo al baño maría, para después obtener la muestra.

CATALASA

1.- Colocamos una muestra de la colonia en un portaobjeto y después le agregamos una gota de agua oxigenada para ver si era positiva.